narzędzia
DAPI
| DAPI | ||||||
|
||||||
| Ogólne informacje | ||||||
| Nomenklatura systematyczna (IUPAC): | ||||||
| 2-(4-amidynofenylo)-1H -indolo-6-karboksyamidina | ||||||
| Inne nazwy | 4',6-diaminoino-2-fenylindol | |||||
| Wzór sumaryczny | C16H15N5 | |||||
| SMILES | C1=CC(=CC=C1C2=CC3=C(N2)C=C(C =C3)C(=N)N)C(=N)N | |||||
| Masa molowa | 277,324 g/mol | |||||
| Wygląd | żółte, drobnokrystaliczne ciało stałe | |||||
| Identyfikacja | ||||||
| Numer CAS | 28718-90-3 | |||||
|
||||||
| Niebezpieczeństwa | ||||||
 |
||||||
| Klasyfikacja UE | Treść oznaczeń: Xi - drażniący |
|||||
| Zwroty ryzyka | R: 46 | |||||
| Zwroty bezpieczeństwa | S: 2/24/36/37/39 | |||||
| Jeżeli nie podano inaczej, dane dotyczą warunków standardowych (25°C, 1000 hPa) |
||||||
DAPI (nazwa systematyczna: 4',6-diaminoino-2-fenylindol) - organiczny związek chemiczny, aromatyczna, heterocykliczna amina stosowana jako barwnik fluorescencyjny silnie wiążący się do DNA (dwuniciowego) na zasadzie interkalacji [1][2].
Powszechnie używany do wybarwiania jąder komórkowych lub chromosomów (poprzez wizualizację DNA) w mikroskopii fluorescencyjnej [3]. Ponieważ DAPI przenika przez nienaruszone błony biologiczne, może być używany do wybarwiania zarówno żywych komórek jak i utrwalonych [4].
W mikroskopii fluorescencyjnej DAPI jest wzbudzany światłem ultrafioletowym. Związany do DNA ma maksimum absorpcji przypadające na długość fali świetlnej równą 358nm, a maksimum emisji przy 461nm (kolor niebiesko-fioletowy). DAPI wiąże się także do RNA, aczkolwiek słabiej. Maksimum emisji DAPI związanego z RNA jest przesunięte do około 400nm [5].
Niebieska emisja DAPI jest bardzo wygodna w obrazowaniu fluorescencyjnym przy użyciu kilku różnych barwników jednocześnie, ponieważ nie pokrywa się ona z emisją innych popularnych fluoroforów (na przykład zielonym GFP czy fluoresceiną).
Poza wybarwianiem jąder komórkowych, DAPI jest także używane do wykrywania mykoplazm [6] lub wirusów (także na zasadzie wiązania ich DNA) [7] w kulturach komórkowych.
Ponieważ DAPI wiążę się bardzo ściśle z DNA na zasadzie interkalacji i tym samym zaburza jego strukturę, związek ten jest toksyczny i mutagenny. Przy pracy z DAPI powinno się zachować szczególną ostrożność.
Po lewej obraz z nałożonymi sygnałami ze wszystkich kanałów barwnych, po prawej obraz z kanału z sygnałem pochodzącym tylko od DAPI.
Przypisy
- ↑ Chandra P., Mildner B., Dann O., Metz A. Influence of 4'-6'-diamidino-2-phenylindole on the secondary structure and template activities of DNA and polydeoxynucleotides.. Mol Cell Biochem. Dec 29;18, 2-3, 81-6. 1978. PMID 604784.
- ↑ Kreuter J., Liehl E. Protection induced by inactivated influenza virus vaccines with polymethylmethacrylate adjuvants.. Med Microbiol Immunol. Jul 4;165, 2, 111-7. 1978. PMID 672773.
- ↑ Lin MS., Alfi OS., Donnell GN. Differential fluorescence of sister chromatids with 4'-6-diamidino-2-phenylindole.. Can J Genet Cytol. Sep;18, 3, 545-7. 1977. PMID 63310.
- ↑ Hull HM., Hoshaw RW., Wang JC. Cytofluorometric determination of nuclear DNA in living and preserved algae.. Stain Technol. Sep;57, 5, 273-82. 1983. PMID 6758206.
- ↑ Manzini G., Xodo L., Barcellona ML., Quadrifoglio F. Interaction of DAPI with double-stranded ribonucleic acids.. Nucleic Acids Res. Dec 20;13, 24, 8955-67. 1986. PMID 4080554.
- ↑ Jagielski M., Zaleska M., Kaluzewski S., Polna I. [Applicability of DAPI for the detection of Mycoplasms in cell cultures]. Med Dosw Mikrobiol. 28, 2, 161-73. 1976. PMID 775226.
- ↑ Mildner B., Chandra P. [Molecular mechanism of action of diamidinephenylindole (DAPI). II. Effect of DAPI on the template activity of DNA and polydeoxynucleotides in the DNA-polymerase system from bacteria, eukaryotic cells and RNA tumor viruses (author's transl)]. Cell Mol Biol Incl Cyto Enzymol. 25, 6, 399-407. 1980. PMID 94275.
